常用的滅菌方法有濕熱滅菌法、干熱滅菌法、氣體滅菌法、輻射滅菌法和過(guò)濾除菌法??筛鶕粶缇锲返奶匦圆捎靡环N或多種方法組合滅菌。只要產(chǎn)品允許,應盡可能選用最終滅菌法(即產(chǎn)品分裝至包裝容器后再滅菌)滅菌。若產(chǎn)品不適合采用最終滅菌法,可選用過(guò)濾除菌法或無(wú)菌生產(chǎn)工藝達到無(wú)菌保證要求,只要可能,應對非最終滅菌的產(chǎn)品作補充性滅菌處理(如流通蒸汽滅菌)。
(一)濕熱滅菌法
本法系指將物品置于滅菌柜內利用高壓飽和蒸汽、過(guò)熱水噴淋等手段使微生物菌體中的蛋白質(zhì)、核酸發(fā)生變性而殺滅微生物的方法。該法滅菌能力強,為熱力滅菌中有效、應用廣泛的滅菌方法。藥品、容器、培養基、無(wú)菌衣、膠塞以及其他遇高溫和潮濕不發(fā)生變化或損壞的物品,均可用本法滅菌。流通蒸汽不能完全殺滅細菌孢子,一般可作為不耐熱無(wú)菌產(chǎn)品的輔助滅菌手段。
濕熱滅菌條件通常采用121℃*15min、121℃*15min或116℃*40min的程序,也可采用其他溫度和時(shí)間參數??傊?,必須保證對熱穩定的物品,可采用過(guò)度殺滅法,其SAL應<=10(-12)。熱穩定性較差產(chǎn)品的標準滅菌時(shí)間F。[指當滅菌溫度為121℃,生物指示菌的耐熱參數D值為1min,滅菌溫度系數Z值為10.0℃時(shí)的標準滅菌時(shí)間(121℃下計算的微生物等效滅活率)]一般不低于8min,如產(chǎn)品的熱穩定性很差時(shí),可允許濕熱滅菌的F。低于8min,此情況下,應在生產(chǎn)全過(guò)程中,對產(chǎn)品中污染的微生物嚴加監控,并采取各種措施降低微生物污染水平,確保被滅菌產(chǎn)品達到無(wú)菌保證要求。
采用濕熱滅菌時(shí),被滅菌物品應有適當的包裝和裝載方式,不能排列過(guò)密,以保證滅菌的有效性和均一性。
濕熱滅菌工藝驗證時(shí),應進(jìn)行熱分布試驗、熱穿透試驗和生物指示劑驗證試驗。以確定滅菌柜空載及不同裝載時(shí)腔室中的熱分布狀況及可能存在的冷點(diǎn);在空載條件下,確認121℃時(shí)腔室各點(diǎn)的溫度差值應<1℃;使用插入實(shí)際物品或模擬物品內的溫度探頭,確認滅菌柜在不同裝載時(shí),最冷點(diǎn)物品的標準滅菌時(shí)間(F。)達到設定的標準;用生物指示劑進(jìn)一步確認在不同裝載時(shí)冷點(diǎn)處的滅菌物品達到無(wú)菌保證水平。本法常用的生物指示劑為嗜熱脂肪芽孢桿菌孢子。
1、熱分布試驗的操作:空載狀態(tài)下的熱分布試驗:
①整個(gè)滅菌腔室內的溫度探頭應均勻分布,將水平和垂直區均覆蓋在內;
②說(shuō)明溫度探頭在腔室內的數量及位置,并有圖示;
③在排水口處,在靠近設備本身的溫度傳感/控制器的位置,應再放置一支探頭;
④在滅菌溫度穩定期,各處溫度應基本保持一致(如各點(diǎn)之間的溫度差在1℃范圍內);
⑤重復試驗至少3次,以證明在該工藝條件下的溫度均一性、重現性、并且與規定標準相符;
⑥每種裝載方式下的熱分布試驗;
⑦在產(chǎn)品容器內以及腔室均勻放置測溫探頭以確定在裝載狀態(tài)下升溫緩慢的位置。此試驗應在最大和最小裝載方式下分別進(jìn)行。
測定不同裝載方式對產(chǎn)品的熱力學(xué)效果的影響,通過(guò)實(shí)驗應得到以下參數:
①保溫階段的最高和最低溫度(溫度范圍)及平均溫度;②最小和最大F。值;③保溫時(shí)間。復試驗裝載3次,以證明在該工藝條件下的溫度均一性、重現性、并且與規定標準相符。
2、熱穿透試驗:通過(guò)在產(chǎn)品容器內均勻分布測溫探頭以確定在滅菌時(shí)相應裝載方式下的冷點(diǎn)。應分別在最大和最小裝載方式下進(jìn)行此試驗,以確定不同裝載方式對被滅菌物品的熱力學(xué)效果的影響,通過(guò)實(shí)驗應能獲得如下數據:各點(diǎn)間的最大和最低溫度(溫度范圍)保溫階段各點(diǎn)的平均溫度、各點(diǎn)的最小及最大F。值、以及各點(diǎn)的保溫時(shí)間。
通過(guò)熱穿透試驗應達到以下目的:①測試數據應證明,在滅菌保溫階段整個(gè)腔室內各容器內的溫度應不超過(guò)士1℃,各容器內溫度之間的最大溫差應不超過(guò)2℃;②根據滅菌參數確定合適的產(chǎn)品滅菌程序;③至少連續運行3次,以確保設定滅菌程序的穩定性和可靠性。
對于腸外用大輸液產(chǎn)品及高黏性的液體產(chǎn)品,必須對容器內的冷點(diǎn)進(jìn)行測試??稍谌萜鲀炔贾?—3個(gè)溫度探頭(插在不同的深度位置)來(lái)獲得此方面的數據,對旋轉滅菌器可以不用考慮容器內的冷點(diǎn)。
用相同的方法對于干熱滅菌設備進(jìn)行驗證試驗,但在保溫期間各點(diǎn)間的溫度差較濕熱的要大,如在強制對流式或隧道式干熱滅菌條件下,各點(diǎn)間溫差會(huì )達到士15℃。另外,與濕熱滅菌相比,干熱滅菌設備內不同類(lèi)別的裝載物及其裝載方式,對熱穿透效果的影響要大得多。